PROTAC体外泛素化测定试剂盒，准确预测PROTAC效率

蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs）已成为靶向不可成药蛋白质组的新型疗法。PROTAC是异型双功能小分子，同时与靶蛋白和泛素（Ub）E3连接酶结合。这随后导致靶蛋白的泛素化和降解。

体外泛素化试剂盒的开发是为了建立一种高通量方法，该方法可以通过监测蛋白质获得泛素化的内在能力来准确预测PROTAC效率。LifeSensors为三种E3泛素连接酶提供该试剂盒：Ceeblon，VHL和HDM2，以监测PROTAC介导的泛素化，以选择靶标。

对于测定，PROTAC首先添加到检测板，然后是E3连接酶和靶蛋白，以实现三元复合物组成作为连续步骤，然后加入含有wt泛素和ATP的E1-E2酶混合物以启动PROTAC介导的泛素化，在反应过程中，多泛素链由E1-E2-E3机械产生的能量被识别并捕获在井中。遵循反应和随后的洗涤步骤，将分离的多泛素化产物与针对感兴趣蛋白质的抗体（不包括）和与HRP缀合的第二抗体（包括）允许通过化学发光进行检测。

因此，捕获的这种“夹心”ELISA样测定中的多泛素化产物是PROTAC的定量测定活动此外，这种检测策略不需要额外的非本地标记或泛素的标记，这可能导致实验假象。

艾美捷PROTAC体外泛素化测定试剂盒#PA-0770-P100组件：

体外泛素化检测板 1 个板

10X 检测缓冲液 1.2毫升

E3 混合 （20X） 1 x 250μL

E1-E2-泛素化混合物 （20X） 1 x 250μL

二抗（抗小鼠或抗兔HRP偶联物） 60μ升 （100X）

检测试剂 1 和 2 DR1- 1毫升和DR2- 1毫升

封闭浓缩液（5X） 5毫米

普罗塔克在二甲基亚种组织中的应用 10微升

靶蛋白阳性对照 BRD3 （20X） 20微升

抗 BRD3 抗体 （100X） 5微升

抗小鼠HRP偶联物（100X） 5微升

PROTAC体外泛素化测定试剂盒的应用：

测试PROTAC和分子胶（MGs）活性。

比较多个 PROTAC 变体，并从 UbMax 建立预测性DC 50。

选择所有三种连接酶来比较PROTACs/MGs活性以证明选择性。

测试 PROTAC 底物特异性和亚型选择性。