Worthington蘑菇多酚氧化酶的特性及测定方案

多酚氧化酶（酪氨酸酶）（TY）是一种双功能的含铜氧化酶，具有儿茶酚酶和甲酚酶活性（Malmström 和 Rydén 1968）。

乔利等人。(1974) 将其称为氧和 4 电子转移酚氧化酶。它负责整个系统发育规模的褐变反应。尽管已经纯化了粗糙脉孢菌的酪氨酸酶（Fling et al . 1963），但大部分工作都是用蘑菇酶完成的，尽管产量和一致性都很差；Smith and Krueger (1962) 证明了它的多样性。Bouchilloux等人。(1963) 获得了四种酶。

Worthington 蘑菇多酚氧化酶的特性：

分子量：128,000 (Duckworth and Coleman 1970)。

组成：该酶是一种四聚体，每个分子含有 4 克铜原子 (Jolley et al . 1974)，以及包括酚底物在内的芳香族化合物的两个结合位点。还有一个明显不同的氧结合位点，即铜位点（Duckworth and Coleman 1970）。铜可能处于亚铜状态；该酶的失活与Cu 2+的增加有关。（Kertész等人，1972 年）。氨基酸组成已确定。Jolley等人报道了广泛的结构研究。（1969）；和达克沃斯和科尔曼（1970）。另见 Jolley等人。（1972 年、1973 年和 1974 年）。

最佳 pH 值：6.0-7.0。

消光系数：消光系数= 24.9（纯化后立即）（Duckworth 和 Coleman 1970）。

抑制剂：与铜络合的化合物。该酶还被苯甲酸对儿茶酚和氰化物对氧的竞争性抑制（Duckworth 和 Coleman 1970）。

艾美捷Worthington 多酚氧化酶活性：

多酚氧化酶是一种氧转移酶。除了使用 O 2催化邻苯二酚脱氢生成邻醌和苯酚邻羟基化生成邻苯二酚外，Strothkamp 和 Mason (1974) 还报道了过氧化物酶活性。Kertész等人已经报道了动力学研究。（1971）。另见 Malmström 和 Rydén 的评论。

特异性：大量对位取代的儿茶酚被氧化（Duckworth 和 Coleman 1970）。

稳定性：冻干制剂在 -20°C 下可稳定保存 6-12 个月。

艾美捷Worthington 多酚氧化酶测定：

方法：多酚氧化酶将酪氨酸氧化为二羟基苯丙氨酸，二羟基苯丙氨酸又被氧化为邻醌。后者伴随着 280 nm 处吸光度的增加。增加的速率与酶浓度成正比，并且在初始滞后后的 5-10 分钟内呈线性关系。在指定条件下，在 25°C、pH 6.5 下，一个单位在 280 nm 处引起每分钟 0.001 的吸光度变化。

试剂：

0.5 M 磷酸钾缓冲液，pH 6.5

0.001 M L-酪氨酸

酶：

以 1 mg/ml 的浓度溶解在试剂级水中。在试剂级水中进一步稀释至 200-400 单位/毫升的浓度。

程序：

将分光光度计调整到 280 nm 和 25°C。将移液器移入每个比色皿，如下所示：

0.5 M 磷酸盐缓冲液，pH 6.5 1.0 毫升

0.001 M L-酪氨酸 1.0 毫升

试剂级水 0.9 毫升

通过毛细管将氧气鼓泡到比色皿中 4-5 分钟，使该反应混合物充氧。将比色皿转移到分光光度计并记录 A 280 4-5 分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。加入 0.1 ml 适当稀释的酶，记录 A 280 10-12 分钟。从曲线的线性部分确定 ΔA 280 。预计会有 2-3 分钟的非线性“滞后”。