了解金黄色葡萄球菌

一、金黄色葡萄球菌简介

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus S. aureus）也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，无芽孢，无鞭毛，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中，空气、污水等环境中也无处不在。它是一种人兽共患病原菌，可导致人和动物的多种疾病，包括伪膜性肠炎、败血症和脓毒症等，严重威胁人类和动物的生命安全。

常见真菌；酵母菌,霉菌,还有香菇、草菇、金针菇等大型真菌

界：细菌界

门：厚壁菌门

纲：芽孢杆菌纲

目：芽孢杆菌目

科：葡萄球菌科

属：葡萄球菌属

二、抗原

2.1 葡萄球菌A蛋白（SPA)：存在于细胞壁上的表面抗原，可与IgG的表面Fc段结合，可进行协同凝集，并具有抗吞噬等生物活性。

2.2 荚膜多糖：有利于粘附和抗吞噬。

2.3 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。

三、分类

3.1 按DNA相关性分：金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌

3.2 按有无凝固酶（血浆凝固酶）分：凝固酶阳性菌，凝固酶阴性菌

四、抵抗力

4.1 金黄色葡萄球菌抵抗力强。

4.2 对碱性染料（龙胆紫）敏感性强。

4.3 对青霉素、金霉素、红霉素、庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性较差。

4.4 易产生耐药性，尤其对青霉素。

五、生物学特性

金黄色葡萄球菌形态为球形，在培养基中菌落特征表现为圆形，菌落表面光滑，颜色为无色或者金黄色，无扩展生长特点，将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中，在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。

金黄色葡萄球菌对高温有一定的耐受能力，在80℃以上的高温环境下30min才可以将其彻底杀死，另外金黄色葡萄球菌可以存活于高盐环境，最高可以耐受15％浓度的NaCl溶液。由于细菌本身结构特点，利用70％的乙醇可以在几分钟之内将其快速杀死。金黄色葡萄球菌代谢类型为需氧或兼性厌氧，对环境要求不高，37℃为最适生长温度，能在各种恶劣环境中存活下来，因此，用一般的营养琼脂即可正常培养细菌。

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌 在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25％左右，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌。

六、检测方法

6.1 传统分离鉴定方法

世界上对食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用生化鉴定的手段，并在初期采用平板划线分离。当前我国检测食品中金黄色葡萄球菌依据国家标准《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（GB4789.10-2016） 国家标准执行内容包括定性检测和定量检测两部分。在无菌条件下接种到肉汤中进行前增菌，最后将培养物接种划线，根据生化鉴定方法进行血清学鉴定。传统生化鉴定方法操作简单，稳定性强，成本低，是最常用的鉴定方法。

6.2 免疫学检测方法

免疫学检测方法主要是基于免疫学理论研究，其是通过设计的抗原、抗体和免疫细胞，检测抗原和抗体的结合以及免疫细胞分泌的细胞因子的，从而达到检测目的一种实验方法。该技术方法主要包括酶联免疫法、免疫荧光法、免疫胶体金法等。

①酶联免疫法：其原理是利用抗体与抗原在载体表面的特异性结合，加入某种酶，酶与抗体或抗原结合在一起，从而形成可以跟踪抗体或抗原的标记物，由于抗原或抗体与受检样品的反应产生抗原或抗体的复合物，此时加入酶反应显色底物，产物的量的大小与检测物质的量的大小呈正相关，分析显色情况从而确定样品中待检测物的含量。已经开发了几种根据 ELISA 技术用于检测培养上清液和食物样品（例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶）中的金黄色葡萄球菌。

②免疫荧光法：免疫荧光技术利用荧光色素对抗体或抗原进行标记，然后检测目标抗原或抗体。抗原和抗体特异结合后，通过考察荧光信号的强弱进行定性定量检测。与酶介导的免疫测定相比，基于荧光的免疫测定具有提供高通量分析和灵敏度的更大潜力。

③免疫胶体金法：该方法借助硝酸纤维膜为固定相载体，样品溶液通过毛细作用在试纸条中移动，在试纸条中同时加入了针对待检测物质特异性的抗原或抗体。与 ELISA 技术相比，免疫胶体金技术操作更为简单，对实验人员没有特别的技术要求，适合基层单位和现场诊断。但是免疫胶体金相比较 ELISA 法而言，灵敏度更低，且使用范围不广，需要进一步的研究。总体而言，免疫胶体金有着强大的发展潜力和广阔的应用前景。

6.3 分子生物学检测方法

该技术主要包括聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术，核酸探针技术，环介导等温扩增技术等技术。

①聚合酶链反应技术：该方法的原理是在DNA聚合酶的作用下，游离的脱氧核糖核酸参照碱基互补配对的原则，以模板DNA为主链，通过提供一段引物，迅速的扩增DNA的双螺旋结构。PCR 技术特异性强、敏感度高，已广泛应用于医学、生物学等领域中。PCR作为致病微生物的检测方法，稳定性强，是主流的检测方法。在微生物检测应用中，引物的设计以及靶序列的选择是PCR方法的核心。PCR法同时也有一定的局限性，由于该方法需要对样品进行增菌，食品成分复杂，会对实验造成干扰。与其他方法相比，PCR技术仪器设备价格高，需要花费的成本较高，推广普及需要一定的时间和资金支持。

②核酸探针技术：通过使用基因特异性核苷酸序列作为探针与目的DNA杂交的一种核酸杂交技术，通过检测该段特异性的标记物，从而判断是否含有目标微生物。核酸探针具有分子生物学检测技术的灵敏度高、特异性强的优点，但是实验周期长，操作繁琐，如果样品中目标微生物含量过低，极易造成样品目标微生物未检出，出现假阴性的实验结果。

③环介导等温扩增技术：该技术基于DNA扩增技术，能够在恒温条件下，根据设计的多对引物，利用链置换型DNA聚合酶快速的进行核酸的扩增。与PCR方法比较，环介导等温扩增法操作更加快捷简单，花费成本较低，且对仪器要求低，能够广泛利用在食源性致病微生物的检测中。

6.4 其他方法

试剂盒法：试剂盒法通常将十多种，甚至几十种培养基或成分集中在特定微型装置内，通过观察微生物的生长和代谢过程的某些产物或现象，对试验现象进行分析，将传统试验中多次试验通过一次完成，缩短了检测时间。此法可大大缩短测试时间，在24h内得出结果，甚至某些可缩短至4h内。用于检测金黄色葡萄球菌的成品试剂盒有API、MIS等。

测试片法：其将纸膜、纸片或胶片附着相关培养基和特定显色液作为金葡菌的培养载体，依据金葡菌在载体上的生长以及显色情况，来衡量食品中金黄色葡萄球菌的存在数量，该方法简便易行，但结果精度不高。