学习笔记Day17:转录组上游分析-1

2024-03-27 02:36

本文主要是介绍学习笔记Day17:转录组上游分析-1,希望对大家解决编程问题提供一定的参考价值,需要的开发者们随着小编来一起学习吧!

转录组上游分析-1

作业:
  • 取出fastq文件中的所有序列ID(第一行)

    less SRR1039510_1.fastq.gz | awk '{if(NR%4==1){print $0}}'less SRR1039510_1.fastq.gz | paste - - - - | cut -f 1 
    
  • 取出fastq文件中的所有序列(第二行)同上

  • 对序列出现次数进行统计

     less SRR1039510_1.fastq.gz | paste - - - - | cut -f 2 | sort | uniq -c | sort -nk 1
    

    如果某一序列出现次数非常高,考虑可能是核糖体RNA?或实验过程中的异常情况,可以比对序列来查看该序列来源

数据质控

数据质量评估
  • FastQC软件:可以对fastq格式的原始数据进行质量统计。

    • 官方网站—帮助文档

    • 常用参数:

      在这里插入图片描述

    • 任务运行

      1. 在当前窗口直接运行
      2. 将命令后台运行nohup ... &
      3. 将命令写入sh脚本,使用nohup ... &运行脚本
    • 绝对路径运行脚本

      multiqc=/home/t_rna/miniconda3/envs/rna/bin/multiqc
      fastqc=/home/t_rna/miniconda3/envs/rna/bin/fastqc
      fq_dir=$HOME/project/Human-16-Asthma-Trans/data/rawdata
      outdir=$HOME/project/Human-16-Asthma-Trans/data/rawdata# 使用绝对路径运行
      $fastqc -t 6 -o $outdir ${fq_dir}/SRR*.fastq.gz >${fq_dir}/qc.log
      
    • 确定后台任务结束

      1. 看结果目录有无正常结果生成
      2. htop中是否有命令正在运行
      3. ps fx看本人的进程
      4. 读输出的运行日志
    • 质控后生成的html文件即质控报告

      在这里插入图片描述
      在这里插入图片描述

      数据量统计方式:生物学中碱基数量VS计算机中的存储字节(需要加以区分)

      • per base sequence quality

        按位置展示碱基质量的箱线图

      • per sequence quality scores

        横坐标:一条序列碱基的平均Q值(一条序列中N越多,质量值越低)

        纵坐标:每个质量值对应的read数

        较好结果:

        在这里插入图片描述

      • per base sequence content

        每个碱基位置上:ATGC含量的分布图

        理论上G/C、A/T的含量在测序循环上应分别相等,且稳定呈水平线。

        差数据:出现分离。

      • per sequence GC content

        GC含量分布图,蓝色和红色线分别为理论值和实际值,越接近越好;一般呈单峰分布。

      • Atapt

        公司提供数据

    • 整合FastQC结果

      multiQC *zip

数据过滤

原始序列质量控制标准:

  1. 去除含接头的reads;
  2. 过滤去除低质量值数据,确保数据质量;
  3. 去除含有N(无法确定碱基信息)的比例大于5%(可以自定义)的reads。
过滤接头
  • trim_galore

    在这里插入图片描述

    • 单个样本的运行

      trim_galore -q 20 --length 20 --max_n 3 --stringency 3 --fastqc --paired -o ./ ../../rawdata/SRR1039510_1.fastq.gz ../../rawdata/SRR1039510_2.fastq.gz
      
    • 多个样本的运行

      • 先获得样本名组成的文件ID

      • while循环

        # 多个样本 vim trim_galore.sh,以下为sh的内容
        rawdata=$HOME/project/Human-16-Asthma-Trans/data/rawdata
        cleandata=$HOME/project/Human-16-Asthma-Trans/data/cleandata/trim_galore
        cat ID | while read id
        dotrim_galore -q 20 --length 20 --max_n 3 --stringency 3 --fastqc --paired -o ${cleandata} ${rawdata}/${id}_1.fastq.gz ${rawdata}/${id}_2.fastq.gz
        done
        
  • Tips:

    后台任务转前台:jobs列出任务;fg %1(任务序号)

    前台任务转后台:Ctrl+Z暂停,jobs列出任务,bg %1(任务序号)

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