【单细胞高级绘图】09.细胞通讯_两组比较_连线图

上周一位读者联系我，让我帮忙发一个绘图的单子。在朋友圈发单后，感兴趣的朋友很多，有十几位还私聊我让我分享一下代码，可见大家还是很感兴趣的。不过等了两天，依旧没有勇士接单，可能是因为这种图比较少见，大家画得少。

先来理解一下这张图，在b图中：

• 左边是EC细胞表达的ligand，右边是mNEUR细胞表达的receptor。
• ligand这一列对应的基因会排序，依据是两个group(比如young和old两组)在EC细胞中找完差异基因后，能知道这些基因的log(FC_young_to_old)，从大到小依次往下排，并涂色。同时，找差异基因也能知道p值，原文表示显著性用的是圆环的颜色，越显著，圆环颜色越深。
• receptor这一列类似ligand列，不过是在mNEUR细胞中，两组之间找差异基因。
• 图中的线段，表示ligand-receptor对，而这个信息（谁和谁构成受配体）是已知的，数据库可以下载到（也就是说，这个图即便不做细胞通讯分析，只要能下载到ligand-receptor信息，也能画）。cellphonedb的输出结果也间接含有这个信息，我的代码基于这个。
• 至于连线的颜色，我看了一下，没怎么变化，所以我推测线段的颜色取决于线段两侧ligand-receptor是高表达还是低表达，高表达时线段用浅红色，低表达时线段用浅蓝色。

以上解读均为我的理解，我没有看原文。我的图会略作更改，下文会说。

另外，因为一些互作关系没法用一个ligand一个receptor去表示，这样的pair不适合用这个图展示。

此篇推文的代码一共有3个：CCC_compare2.R、CCC_line.R、CCC_line2.R。每个代码都能出一张有意义的图。

准备数据

source("CCC_compare2.R")
CCC_compare2(group1.name = "Old",group2.name = "Young",group1.pfile = "cellphonedb/Old/pvalues.txt",group1.mfile="cellphonedb/Old/means.txt",group2.pfile="cellphonedb/Young/pvalues.txt",group2.mfile="cellphonedb/Young/means.txt",p.threshold = 0.05,thre=0.5,cell.pair="EC|APC", #指定ligand产生的细胞|receptor产生的细胞plot.width=15,plot.height=30,filename = "test3_"
)

前几行代码跟上一节是类似的，也能输出一个表格（test3_Old2Young.xlsx）和对应的气泡图。
后续的连线图基于这个表格的数据。

连线图有个特点，就是"谁是ligand，谁是receptor，ligand和receptor分别由什么细胞产生"非常明确，CCC_compare2.R这个代码比CCC_compare.R (在上一节)增加一百多行去理清这个事情，输出的图和表格pair左边的就是ligand(产生的细胞)，右边的就是receptor(产生的细胞)

连线图的绘制 第1种方法

source("CCC_line.R")
CCC_line(table.path="test3_Old2Young.xlsx",ligand.cell="EC",receptor.cell="APC",group1.name = "Old",group2.name = "Young",#这五个参数和上一步对应ligand.color="#4dbbd6",receptor.color="#90d1c1",pt.size=6,line.thre1=0.5,line.thre2=6,#line.thre1和上一步的"thre"参数一致，line.thre2可以用来调整线的粗细，值越大，线越细file.name="test3_",plot.width=25,plot.height=20)

第一种方法不涉及差异基因，因此左右两列是统一的圆点。线段粗颜色红，表示（相较于group2）group1的互作强；线段粗颜色蓝，表示（相较于group2）group1的互作弱。

连线图的绘制 第2种方法

library(Seurat)
testseu=readRDS("testseu.rds")
# 此次演示为了加快运行速度，人为减少了数据量，实际分析中找差异基因不建议这么做
selectedCB=sample(testseu@meta.data$CB,1000)
testseu=testseu%>%subset(CB %in% selectedCB)# 基于分组找差异基因
marker_group=data.frame()
Idents(testseu)="celltype_age"
for ( ci in c("EC","APC") ) {tmp.marker <- FindMarkers(testseu, logfc.threshold = 0, min.pct = 0.01,only.pos = F, test.use = "wilcox",ident.1=paste0(ci,"_Old"),ident.2=paste0(ci,"_Young"))tmp.marker$gene=rownames(tmp.marker)tmp.marker$cluster_group=ifelse(tmp.marker$avg_log2FC > 0,paste0(ci,"_Old"),paste0(ci,"_Young"))tmp.marker$cluster=citmp.marker=tmp.marker%>%arrange(desc(avg_log2FC))marker_group=marker_group%>%rbind(tmp.marker)
}
#本次演示的数据集为小鼠数据集，在运行cellphonedb时，进行了基因symbol的转换。
#此处找差异基因得到的symbol为真实基因名，为了让两个分析匹配，DEG表格也应该做基因名转换。
#但是为了简化，此处只是简单地将小鼠基因名转为大写，不是很精确。大家在分析的时候建议严格一点。
marker_group$gene=marker_group$gene %>% toupper()

第二种方法需要不设置筛选条件去找差异基因，然后用CCC_line2函数就可以了

source("CCC_line2.R")
CCC_line2(cpdb.table.path = "test3_Old2Young.xlsx",marker_group = marker_group,ligand.cell = "EC",receptor.cell = "APC",group1.name = "Old",group2.name = "Young",line.size = 2,file.name = "test3_",plot.width = 25,plot.height = 20)

这种方法得到的图，左右两列添加了差异基因相关的信息，p值、log2FC。线段的粗细固定了，线段的颜色表示（相较于group2）group1的互作强弱。

本文代码编写(3个函数)花费大量时间，故不无偿提供，有需要的朋友可以公粽号后台回复2022B