Cell Biolabs丨艾美捷——NIH3T3/Cas9细胞

NIH 3T3细胞是从NIH瑞士小鼠胚胎中建立的。这些细胞高度接触抑制对肉瘤病毒病灶形成和白血病病毒传播敏感。细胞现在已经丢失了他们的接触抑制。已建立的NIH3T3生产线进行了5次以上的连续循环试验亚克隆以形成具有最适合转化的形态特征的亚克隆化验。“3T3”名称是“3天转移，接种物3 x 105”的缩写细胞。“那NIH3T3细胞系是zui 常用的成纤维细胞系之一。Cell Biolabs /NIH3T3/Cas9细胞系稳定表达Cas9和嘌呤霉素抗性基因。Cas9和嘌呤霉素耐药基因均为阴性使用逆转录病毒导入亲代NIH3T3细胞。

Cell Biolabs

Cell Biolabs：细胞学试剂品牌，为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的技术和服务。主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。

Cell Biolabs / 艾美捷 NIH3T3/Cas9细胞系表达Cas9蛋白。检测NIH3T3细胞或NIH3T3/Cas9细胞用RIPA缓冲液溶解，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA试剂盒（Cat）检测Cas9蛋白水平#PRB-5079）（见下图）。

该冷冻瓶至少含有1.0×10，6台盼蓝形态学测定的NIH3T3/Cas9细胞染料排除和活细胞计数。NIH3T3/Cas9细胞经测试无微生物污染。

1.培养基：D-MEM（高糖），10%胎牛血清（FBS），0.1 mM MEM非必需氨基酸（NEAA），2 mM L-谷氨酰胺，1%Pen-Strep，（可选）1-2µg/mL嘌呤霉素。

2.冷冻培养基：70%DMEM、20%FBS、10%DMSO。

过程：

1.将10毫升完整的DMEM生长培养基置于50毫升锥形管中。解冻冰冻的食物在37°C水浴中轻轻搅拌，在1-2分钟内将细胞冷冻。净化空气用70%（v/v）乙醇擦拭冷冻瓶表面。

2.将解冻的细胞悬浮液转移到含有10mL生长培养基的锥形管中。

3.在室温下，以1000 rpm的转速离心5分钟，收集细胞。移除通过抽吸生长培养基。

4.通过轻轻移液，将细胞重新悬浮在锥形管中的15ml新鲜生长培养基中然后下来。

5.将15 mL细胞悬浮液转移至T-75组织培养瓶中。将电池置于37°C的温度下培养箱中的二氧化碳浓度为5%。

6.每天监测细胞密度。细胞应在培养物达到95%汇合时传代。

Cell Biolabs 相关试剂盒研究方案：

1.CBA-100：细胞选择™ 24孔细胞迁移试验（8µm，比色法）

2.CBA-106：细胞选择™ 96孔细胞迁移分析（8µm，荧光法）

3.CBA-120：细胞选择™ 24孔伤口愈合试验（显微镜）

4.CBA-125：半径™ 24孔细胞迁移分析（显微镜）

5.CBA-126：半径™ 96孔细胞迁移分析（显微镜）