m6A去甲基化酶激活/抑制检测试剂盒实验原理

本文主要是介绍m6A去甲基化酶激活/抑制检测试剂盒实验原理，希望对大家解决编程问题提供一定的参考价值，需要的开发者们随着小编来一起学习吧！

m6A的获得或丧失可导致RNA病毒发生重大功能变化，从而改变其宿主细胞的融合/进入，复制，传播，致病强度和免疫逃逸。m6A 在调节DNA复制、DNA损伤、RNA剪接、转座、转录和细胞防御方面起着至关重要的作用。

关于去甲基化研究，Nature又出新文章“RNA demethylation increases the yield and biomass of rice and potato plants in field trials”。

该研究首次开发了利用RNA表观遗传修饰N6-甲基腺嘌呤（m6A）直接提高植物生物量、产量和抗逆的新技术。通过在水稻和马铃薯中引入FTO实现m6A RNA的去甲基化修饰，使得田间试验的产品和生物量增加约50%。

在人类细胞中，m6A修饰可能由甲基转移酶复合物 METTL3/METTL14 催化，并被 α-酮戊二酸 (α-KG) 和 Fe2+ 依赖性双加氧酶如 FTO、ALKBH5 和TET样酶去除，这个过程是动态可逆的。结果表明，METTL3和 α-KG /Fe2+ 依赖性双加氧酶对生物的生长代谢和繁殖过程都发挥着重要作用。

测量m6A RNA甲基酶活性/抑制和去甲基酶活性/抑制水平将使我们能够更好地了解腺嘌呤A、N6-甲基腺苷之间的关系。对RNA甲基化和RNA去甲基化的可逆循环的研究，将对调节胚胎发育和细胞生长方面起到广泛的作用。

艾美捷 Epigenase m6A Demethylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric)m6A去甲基化酶激活/抑制检测试剂盒（比色法）——利用核提取物或纯化的m6A去甲基化酶——FTO及ALKBH5，测定总m6A去甲基化酶的激活/抑制效果。该试剂盒适用于多数物种比如哺乳动物、植物、真菌和细菌等。

实验原理

m6A底物包被在板上，m6A去甲基化酶结合在底物上，并将底物中的m6A去甲基化。底物中未被去甲基化的m6A可以被m6A抗体特异性识别，然后通过后续显色系统增强免疫信号，zui终达到比色定量的目的。在试剂盒的组分中含有2ug/ml的FTO去甲基酶，通过添加不同浓度重组FTO酶，测定OD值。OD值与FTO酶活性成反比。