AAT Bioquest生物偶联：生物素和链霉亲和素丨染料和试剂盒方案

AAT Bioquest致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

艾美捷AAT Bioquest生物偶联相关研究：

生物素和链霉亲和素

染料到蛋白质偶联

iFluor® 染料和试剂盒

mFluor™ 染料和试剂盒

蛋白质间偶联

1、生物素-链霉亲和素偶联系统：

生物素-链霉亲和素偶联系统的广泛采用主要归因于两个因素。首先是生物素和链霉亲和素分子本身的尺寸相对较小，这允许与生物活性大分子（如抗体）广泛结合，而不会阻抗其功能（即抗体的结合位点）。其次是生物素和链霉亲和素相互结合的特异性以及随后结合的强度，这使得强大的、流线型的生物测定应用成为可能。链霉亲和素四聚体对生物素具有极高的结合亲和力，解离常数 （Kd） 约为 ~10-14mol/L。这种紧密而特异性的结合速度很快，可以承受极端的pH值、温度、有机溶剂和变性试剂。

优势

生物素-链霉亲和素系统的一个关键优势是它能够提高检测灵敏度。这在很大程度上是由于链霉亲和素的四聚体构象。一种链霉亲和素蛋白可以结合四个生物素分子，具有高亲和力和选择性。这种多重性能够放大微弱信号，并通过简单的工作流程提高哺乳动物细胞或组织中中等和低丰度靶标的检测灵敏度。

另一个关键优势是生物素-链霉亲和素系统的多功能性。由于链霉亲和素可以与各种报告基因标签偶联，因此它可以很容易地掺入几乎所有免疫测定中。例如，链霉亲和素的酶偶联物广泛用于酶联免疫吸附测定 （ELISA），而荧光标记的链霉亲和素（如 iFluor® 488 链霉亲和素）则广泛用于细胞表面标记、荧光激活细胞分选 （FACS） 和其他荧光成像应用。

应用

酶联免疫吸附试验（ELISA）

免疫组化 （IHC）

功率苯胺信号放大，酪胺™的优质替代品

免疫印迹

免疫荧光显微镜

细胞表面标记

亲和纯化

荧光激活细胞分选 （FACS）

流式细胞术

2、生物素：

生物素是一种 244 道尔顿半抗原小分子。其对链霉亲和素的高结合亲和力通常用于检测和监测感兴趣的生物靶标。生物素具有两个特性，使其成为生物偶联物开发的理想选择。首先，生物素的体积相对较小。这允许将多个生物素标签标记到单个蛋白质或抗体上，而不会显着阻碍其生物反应性。第二个是生物素分子的戊酸侧链。该链可以衍生化，以促进用于将生物素与蛋白质偶联的各种反应性基团掺入，而不会改变生物素对链霉亲和素的结合亲和力。

AAT Bioquest 提供生物素化的二抗、蛋白质、核苷酸和其他小分子，用于基于链霉亲和素的扩增技术。对于无法获得生物素化探针的检测，我们提供了许多生物素化试剂和试剂盒，使研究人员能够对蛋白质、核酸和表面材料进行化学标记，以制造定制的生物素化试剂。

特色产品

荧光生物素衍生物

生物素化次级

生物素化核苷酸

生物素化氨基酸

反应性生物素衍生物

ReadiLink™ 蛋白生物素化试剂盒

Amplite® 比色生物素定量试剂盒

3、荧光生物素衍生物

荧光生物素衍生物在同一分子中含有荧光团和生物素部分。这些试剂用于通过荧光检测和定量生物素结合蛋白。与链霉亲和素与荧光生物素结合相关的强猝灭可用于精确测量链霉亲和素（或亲和素）的浓度。

4、生物素化二抗

AAT Bioquest生物素化的二抗，用于基于链霉亲和素的扩增技术。使用生物素化二抗的一个关键优势是，通过使用不同的链霉亲和素偶联物，可以灵活地在多种应用中使用相同的二抗。

现成的链霉亲和素偶联物

HRP-链霉亲和素（成像需要 HRP 底物)

AP-链霉亲和素（成像需要 AP 底物)

iFluor®-链霉亲和素

mFluor™-链霉亲和素

APC、PE和串联染料链霉亲和素（藻胆蛋白的强烈明亮荧光和快速光漂白非常适合流式细胞术应用）

5、生物素化核苷酸

生物素修饰的三磷酸核苷类似物，如 dUTP 和 dCTP，可以酶促掺入 DNA 或 RNA 片段中，用于荧光原位杂交 （FISH）、DNA 阵列、微阵列和其他杂交技术。标准的酶促非放射性 DNA 标记反应包括 3 端标记、cDNA 标记、缺口翻译、PCR 和随机引物标记。每个生物素化核苷酸在生物素与其在核苷酸上的附着点之间含有一个 11、14、16 或 20 原子间隔区。这有助于通过荧光团和链霉亲和素偶联物或琼脂糖和磁珠进行检测和信号放大。

6、生物素化氨基酸

生物素化肽适用于免疫检测研究和生物医学筛选测定，这些研究需要固定在链霉亲和素或亲和素包被的微量滴定板、微球或膜上。在Fmoc固相合成过程中，生物素可以与肽的N端或赖氨酸（Lys）、谷氨酸（Glu）或天冬氨酸（Asp）的侧链连接。在 FMOC-Glu（生物素基-PEG）-OH 和 FMOC-Asp（生物素-PEG）-OH 中掺入 PEG 间隔区可减少靶肽和链霉亲和素之间的空间位阻，从而更好地结合生物素。PEG间隔区的亲水性可最大限度地减少非特异性相互作用，并提高试剂和生物素化肽的溶解度。

7、反应性生物素衍生物

反应性生物素衍生物含有反应性部分，如琥珀酰亚胺酯或马来酰亚胺，有助于将生物素标记到蛋白质、抗体和其他大分子上。选择反应性生物素衍生物时，请考虑以下几点：

功能基团靶向 - 特定的反应性部分靶向并结合其各自的官能团，以实现蛋白质和其他大分子的靶向或非选择性生物素化（例如，琥珀酰亚胺酯靶向伯胺，马来酰亚胺靶向硫醇或巯基）。

溶解度 - 这会影响目标蛋白或大分子的生物素化。

间隔臂长度 （PEG） - 提高靶蛋白的检测灵敏度并减少空间位阻。

ReadiView™ 生物素化试剂

确定蛋白质的生物素化程度是相当具有挑战性的，因为生物素的内在吸收很难从蛋白质和核酸中辨别出来。为了促进这种测定，我们提供了一系列发色团反应性生物素衍生物ReadiView™生物素。

这些新型生物素化试剂包含一个专门设计的“色标 （CT）”，该标签最佳位置位于两个间隔臂之间。这些间隔臂可减少空间位阻并提高水溶性，而 CT 标签可通过计算 280 nm/385 nm 的吸收比轻松量化生物素化程度。CT标签不影响生物素与链霉亲和素的络合，并且对荧光链霉亲和素偶联物的淬灭作用最小。ReadiView™ 生物素有胺反应性、巯基反应性和点击化学形式。

8、酶标记的链霉亲和素偶联物

酶标记的链霉亲和素偶联物通常用于酶联免疫吸附测定 （ELISA）、免疫组化、免疫印迹和原位杂交技术。辣根过氧化物酶 （HRP） 和碱性磷酸酶 （ALP） 因其高周转率、稳定性、易于偶联和低成本而被广泛用作报告基因标签。

为了最大限度地保留酶和蛋白质活性，我们的 HRP-链霉亲和素和 AP-链霉亲和素偶联物以 1：1（酶与链霉亲和素）标记比制备。显色、荧光和化学发光底物可用于这些酶偶联物。

9、荧光链霉亲和素偶联物

荧光链霉亲和素偶联物广泛用于荧光成像，以检测生物素化抗体、配体和 DNA 探针，用于原位杂交技术、免疫组化和多色流式细胞术。我们提供用 iFluor 染料、mFluor®™ 染料、藻胆蛋白、串联染料等标记的荧光链霉亲和素的综合产品组合。我们的 iFluor® 链霉亲和素偶联物的优点包括异常明亮的荧光、出色的光稳定性和在较宽摩尔范围内对 pH 值不敏感的荧光。

iFluor® 链霉亲和素偶联物

用 iFluor 染料标记的链霉亲和素偶联物表现出异常明亮且光稳定的荧光，优于 Alexa Fluor®® 和其他光谱相似的偶联物。iFluor® 链霉亲和素偶联物设计用于各种细胞分析和蛋白质分析应用，包括成像、流式细胞术和荧光免疫印迹。作为预防措施，在检测低丰度靶标时避免使用蓝色荧光链霉亲和素偶联物。与其他染料相比，蓝色荧光染料具有较低的荧光，并且可以经历更高的非特异性背景。

10、用于流式细胞术的mFluor™链霉亲和素偶联物

用 mFluor™ 染料标记的链霉亲和素偶联物表现出最小的自淬灭，可产生用于流式细胞术的强烈荧光和光稳定偶联物。mFluor™ 链霉亲和素偶联物设计用于流式细胞仪中常用的主要激光谱线之一（如 405 nm、488 nm、532 nm、561 nm 或 633 nm 激光谱线）的最佳激发。

11、用于流式细胞术的链霉亲和素 APC、PE、PerCP 和串联染料偶联物

链霉亲和素 PE、APC 和 PerCP 偶联物通常用于需要高灵敏度但不具有光稳定性的应用，主要是流式细胞术、流式细胞仪、免疫表型分析和微阵列。藻胆蛋白异常明亮的荧光是由于其异常高的消光系数和量子产率。

串联染料偶联了标记的供体藻胆蛋白（例如 APC 或 PE）与受体 iFluor 染料的妥协，这些受体 iFluor® 染料以更长的波长发出荧光。使用荧光共振能量转移 （FRET），供体藻胆蛋白吸收的光导致受体的荧光发射。在流式细胞术中，串联染料非常适合细胞的多色参数分析，因为它们利用了单一激发源和显着较大的斯托克斯位移。

12、链霉亲和素-Xtra™ 偶联物

链霉亲和素-Xtra™ iFluor® 偶联物的最佳标记程度可产生最明亮的荧光链霉亲和素偶联物，用于在细胞成像、流式细胞术和蛋白质印迹应用中检测生物素化抗体。链霉亲和素-Xtra™ iFluor 偶联物对低丰度靶标成像，比传统链霉亲和素 Alexa Fluor®® 偶联物具有更高的灵敏度和细节。

优势

明亮且光稳定的荧光，无明显的自猝灭

高信噪比：信号比 Alexa Fluor® 提高 3~5 倍

在较宽的摩尔范围内对 pH 值不敏感的荧光