AAT Bioquest/艾美捷丨链霉亲和素-Xtra™ IF488方案

链霉亲和素偶联物广泛用于与生物素偶联物结合，以检测多种生物靶标，如蛋白质、核酸和其他分子。它们被用作许多生物检测的理想选择，如免疫荧光显微镜、流式细胞术、蛋白质印迹和其他生物应用，因为链霉亲和素具有很强的亲和力结合生物素，在很宽的pH值和温度范围内不受影响。

AAT Bioquest/艾美捷提供多种用经典荧光染料标记的链霉亲和素偶联物（例如：FITC、TRITC、Texas Red®、Cy3®、Cy5® 和 Cy7®），以及我们良好的水溶性、光稳定 iFluor 和 mFluor®™ 染料。然而，传统的生物素-亲和素检测系统仍然受到现有荧光偶联物信号强度有限的限制。链霉亲和素 Xtra™ iFluor 偶联物是一个新的超亮链霉亲和素偶联物家族，具有与 Alexa Fluor 荧光基团几乎相同的激发和发射特性，信号改善 3~5 倍。它是一套强大的工具，用于检测细胞成像或流式细胞术中的低丰度靶标。iFluor® 488 是 FITC 通道成像中非常常见的绿色荧光颜色之一。

AAT Bioquest链霉亲和素-Xtra™ iFluor® 偶联物的合适标记程度可产生极为明亮的荧光链霉亲和素偶联物，用于在细胞成像、流式细胞术和蛋白质印迹应用中检测生物素化抗体。链霉亲和素-Xtra™ iFluor 偶联物对低丰度靶标成像，比传统链霉亲和素 Alexa Fluor®® 偶联物具有更高的灵敏度和细节。

示例协议:

1、储备溶液的制备:

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环

链霉亲和素-Xtra™ IF488储备溶液（1mg / mL）

向小瓶中加入 100 μL（对于 Cat# 46000）或 1 mL（对于 Cat# 46001）的 ddH 2 O，以制备 1 mg/mL 储备溶液。

注意：该构成的储备溶液将在含有 0.2% BSA 的 PBS 中。

2、工作溶液的制备:

链霉亲和素-Xtra™工作溶液

对于IF，建议的染色浓度为1-5 ug/ml。对于 FACS，染色缓冲液中的建议浓度为 0.1-0.5 ug / 100 uL / 百万个细胞。

注意：PBS+0.1%BSA可用作染色缓冲液。

注意：为了获得每种应用的合适的性能，需要仔细确定该试剂的最佳浓度。

注意：建议的工作稀释度仅供参考。建议用户在测试中使用适当的阳性和阴性对照滴定产品。

3、样品实验方案:

根据制造商的建议，用目标抗体封闭和处理样品。

在样品中以适当的浓度和持续时间加入生物素偶联的二抗工作溶液。

注意：请验证您的生物素偶联抗体与实验中使用的一抗的相容性和类型。例如，如果一抗是小鼠抗体，则可以使用与生物素结合的山羊抗小鼠抗体进行测定。

将细胞与链霉亲和素-Xtra™ 工作溶液在室温下孵育 30 分钟至 1 小时。注意：需要仔细确定合适孵育时间。

取出工作溶液，将细胞重悬于您选择的缓冲液中。

使用荧光显微镜拍摄图像或使用流式细胞仪记录强度。

AAT Bioquest链霉亲和素-Xtra™ IF488图像示例：

图 1. 用链霉亲和素-Xtra™ iFluor 偶联物和链霉亲和素 Alexa Fluor® ™ 偶联物染色的 Hela 细胞图像。

Hela 细胞用 4% 多聚甲醛固定 30 分钟，用 0.02% Triton™ X-100 透化 10 分钟，用 1% BSA 封闭 1 小时。然后用 1 μg/mL α 微管蛋白小鼠单克隆抗体在室温下对固定的 Hela 细胞染色 1 小时，然后用 GxM IgG-生物素 （Cat# 16729） 染色，然后用链霉亲和素-Xtra™ iFluor 488 和链霉亲和素-Alexa Fluor™ 488 进行可视化。用 Hoechst 33342（蓝色，货号#17535）对细胞核进行染色。