多肽荧光标记染料介绍,常用的是Cy (Cyanine)系列?

2023-12-21 19:50

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多肽荧光标记染料介绍,常用的是Cy (Cyanine)系列?

     Cy (Cyanine)系列,也叫菁染料,即花青素系列荧光染料是具有多聚次甲基桥链化学结构特点的一类合成荧光染料。Cy染料的次甲基桥链(1-7个次甲基)两端常常连着两个氮原子,其中一个氮原子带正电,从而Cy染料形成具有离域正电荷效应的介离子化合物。因为这个结构特点,Cy染料的消光系数(extinction coefficient)非常高。桥链长度和两端的发色团直接控制着染料的吸收峰和发射峰值,从而让Cy系列染料可以覆盖从紫外到远红外的几乎所有常用荧光谱带。桥链长度和两端的发色团直接控制着染料的吸收峰和发射峰值,从而让Cy系列染料可以覆盖从紫外到远红外的几乎所有常用荧光谱带。

由于细胞和组织的自发荧光在近红外波段最小,因此在检测复杂生物系统时,近红外染料能提供更高的特异性和灵敏度。同时,由于光波在近红外区段的组织透过性更好。菁染料的摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的,Cy7 NHS ester, Cy5.5 amine 和Cy3 azide 的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
CY花菁染料的优点:
1:摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的
2:细胞和组织的自发荧光在近红外波段最小
3:更高的特异性和灵敏度
4:光波在近红外区段的组织透过性更好
5:染料细胞毒性小 可用于标记抗体蛋白细胞。因此CY花菁染料是非常适合做小鼠活体成像的荧光染料
CY花菁染料的缺点:
1:荧光量子效率相比其他染料较低
2:容易发生聚集

多肽荧光标记由于没有放射性,实验操作简单。因此,目前在生物学研究中多肽荧光标记应用非常广泛,多肽荧光标记方法与荧光试剂的结构有关系,对于有游离羧基的采用的方法与接多肽反应相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接。在N端标记FITC的多肽需经历环化作用来形成荧光素,通常会伴有最后一个氨基酸的去除,但当有一个间隔器如氨基己酸,或者是通过非酸性环境将目的多肽从树脂上切下来时,这种情况可避免在切割的过程中被TFA切割掉。
可以利用荧光标记的多肽来检测目标蛋白的活性,并将其发展的高通量活性筛选方法应用于疾病治疗靶点蛋白的药物筛选和药物开发(例如,各种激 酶、磷酸酶、肽酶等)。

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