操作步骤丨皮质醇ELISA试剂盒简单精准定量

2023-11-11 18:50

本文主要是介绍操作步骤丨皮质醇ELISA试剂盒简单精准定量,希望对大家解决编程问题提供一定的参考价值,需要的开发者们随着小编来一起学习吧!

皮质醇ELISA试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定其他血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中皮质醇含量。

艾美捷皮质醇ELISA试剂盒#K003-H1:

检测范围:0.375nmol/L~12nmol/L

灵敏度:0.1

实验原理:将皮质醇(Cor)抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的皮质醇(Cor)与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的皮质醇(Cor)抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0.D.值),计算样品浓度。

皮质醇ELISA试剂盒组分:

71.jpg

皮质醇ELISA试剂盒需自备的设备及试剂:

1. 450±10m滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

2. 单道或多道微量加液器及吸头

3. 稀释样品的印管

4. 蒸馏水或去离子水

5. 吸水纸

6. 盛放洗液的容器

试剂盒的储存及有效期:

1. 未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将TMB洗涤液,终止液保存于4℃,其他试剂保存于-20℃。

2. 使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20°℃,避免潮湿。

注意:

试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在*实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。

皮质醇ELISA试剂盒标本的采集与保存:

1. 血清:

将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4°℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80°℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:

用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8°℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20°℃或-80°℃保存,但应避免反复冻融。

3.组织匀浆:

1)取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L.pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);

2)可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL预冷PBS进行充分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2次)。

3)将制备好的匀浆液于5000×g离心5分钟,留取上清即可检测。

4.细胞裂解液:

1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);

2)将收集到的细胞用冷PBS洗3次;

3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):

i超声破碎:取适量PBS重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。

ii反复冻融:将待破碎的细胞在-200C以下冰冻,室温融解,反复3次,使细胞溶胀破碎。

4)将标本于2-8 °℃1500×g离心10分钟,收集上清备用。

5.细胞培养上清或其它生物标本:

请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20°℃或-80°℃保存,但应避免反复冻融。注意:

1. 以上标本均需密封保存,4℃保存应小于1周,-20℃不应超过1个月,-80°℃不应超过2个月。

2. 标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。

3. 实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

皮质醇ELISA试剂盒试剂准备

1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-250C),试剂不能直接在370C溶解。

2. 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1000ng/mL。准备7个稀释标准品的印管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,依次倍比稀释成不同的梯度, 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

3. 浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。

皮质醇ELISA试剂盒操作步骤:

1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μ1,待测样品孔中先加样品

稀释液40μ1,然后再加待测样品10μ (样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μ1,空白孔除外。

6. 温育:操作同3。

7. 洗涤:操作同5。

8. 显色:每孔先加入显色剂A50μ1,再加入显色剂B50μ1,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。

9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(0D值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

特异性

本试剂盒用于检测皮质醇(Cor),经检测与其它相似物质无明显交叉反应。

由于受到技术及样本来源的限制,不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测,因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%)= SD/mean×100

批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测.每份样本连续测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

批间差:选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

皮质醇ELISA试剂盒稳定性:

经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。

为减小外部因素对试剂金破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

 

这篇关于操作步骤丨皮质醇ELISA试剂盒简单精准定量的文章就介绍到这儿,希望我们推荐的文章对编程师们有所帮助!



http://www.chinasem.cn/article/392136

相关文章

csu 1446 Problem J Modified LCS (扩展欧几里得算法的简单应用)

这是一道扩展欧几里得算法的简单应用题,这题是在湖南多校训练赛中队友ac的一道题,在比赛之后请教了队友,然后自己把它a掉 这也是自己独自做扩展欧几里得算法的题目 题意:把题意转变下就变成了:求d1*x - d2*y = f2 - f1的解,很明显用exgcd来解 下面介绍一下exgcd的一些知识点:求ax + by = c的解 一、首先求ax + by = gcd(a,b)的解 这个

hdu2289(简单二分)

虽说是简单二分,但是我还是wa死了  题意:已知圆台的体积,求高度 首先要知道圆台体积怎么求:设上下底的半径分别为r1,r2,高为h,V = PI*(r1*r1+r1*r2+r2*r2)*h/3 然后以h进行二分 代码如下: #include<iostream>#include<algorithm>#include<cstring>#include<stack>#includ

usaco 1.3 Prime Cryptarithm(简单哈希表暴搜剪枝)

思路: 1. 用一个 hash[ ] 数组存放输入的数字,令 hash[ tmp ]=1 。 2. 一个自定义函数 check( ) ,检查各位是否为输入的数字。 3. 暴搜。第一行数从 100到999,第二行数从 10到99。 4. 剪枝。 代码: /*ID: who jayLANG: C++TASK: crypt1*/#include<stdio.h>bool h

uva 10387 Billiard(简单几何)

题意是一个球从矩形的中点出发,告诉你小球与矩形两条边的碰撞次数与小球回到原点的时间,求小球出发时的角度和小球的速度。 简单的几何问题,小球每与竖边碰撞一次,向右扩展一个相同的矩形;每与横边碰撞一次,向上扩展一个相同的矩形。 可以发现,扩展矩形的路径和在当前矩形中的每一段路径相同,当小球回到出发点时,一条直线的路径刚好经过最后一个扩展矩形的中心点。 最后扩展的路径和横边竖边恰好组成一个直

poj 1113 凸包+简单几何计算

题意: 给N个平面上的点,现在要在离点外L米处建城墙,使得城墙把所有点都包含进去且城墙的长度最短。 解析: 韬哥出的某次训练赛上A出的第一道计算几何,算是大水题吧。 用convexhull算法把凸包求出来,然后加加减减就A了。 计算见下图: 好久没玩画图了啊好开心。 代码: #include <iostream>#include <cstdio>#inclu

uva 10130 简单背包

题意: 背包和 代码: #include <iostream>#include <cstdio>#include <cstdlib>#include <algorithm>#include <cstring>#include <cmath>#include <stack>#include <vector>#include <queue>#include <map>

JAVA用最简单的方法来构建一个高可用的服务端,提升系统可用性

一、什么是提升系统的高可用性 JAVA服务端,顾名思义就是23体验网为用户提供服务的。停工时间,就是不能向用户提供服务的时间。高可用,就是系统具有高度可用性,尽量减少停工时间。如何用最简单的方法来搭建一个高效率可用的服务端JAVA呢? 停工的原因一般有: 服务器故障。例如服务器宕机,服务器网络出现问题,机房或者机架出现问题等;访问量急剧上升,导致服务器压力过大导致访问量急剧上升的原因;时间和

简单的角色响应鼠标而移动

actor类 //处理移动距离,核心是找到角色坐标在世界坐标的向量的投影(x,y,z),然后在世界坐标中合成,此CC是在地面行走,所以Y轴投影始终置为0; using UnityEngine; using System.Collections; public class actor : MonoBehaviour { public float speed=0.1f; CharacterCo

docker-compose安装和简单使用

本文介绍docker-compose的安装和使用 新版docker已经默认安装了docker-compose 可以使用docker-compose -v 查看docker-compose版本 如果没有的话可以使用以下命令直接安装 sudo curl -L https://github.com/docker/compose/releases/download/1.16.1/docker-c

JavaFX环境的搭建和一个简单的例子

之前在网上搜了很多与javaFX相关的资料,都说要在Eclepse上要安装sdk插件什么的,反正就是乱七八糟的一大片,最后还是没搞成功,所以我在这里写下我搭建javaFX成功的环境给大家做一个参考吧。希望能帮助到你们! 1.首先要保证你的jdk版本能够支持JavaFX的开发,jdk-7u25版本以上的都能支持,最好安装jdk8吧,因为jdk8对支持JavaFX有新的特性了,比如:3D等;