Worthington纯化酶制剂助力新生儿心肌细胞分离系统研究

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艾美捷 Worthington 新生儿心肌细胞分离系统的开发旨在为研究人员提供可靠、方便和一致的新生大鼠心肌细胞分离方法。通过使用纯化的而不是粗制的酶制剂,可以最大限度地减少批次间的差异。此外,Worthington 通过从新生大鼠心脏中分离心肌细胞对试剂盒进行使用测试,以确保活细胞的性能、可靠性和一致的产量。

该试剂盒是与 Ronal MacGregor 博士合作制定的。该方法基于 Toraason 等人描述的方法。Toxicol, 56 , 107 (1988),其中将切碎的组织与纯化的胰蛋白酶在 2-8°C 下孵育过夜。正如 Toraason 所指出的,与在温胰蛋白酶或胶原酶中连续孵育所涉及的时间相比,此步骤减少了收获细胞所需的手动操作时间。使用纯化的胶原酶而不是粗胶原酶来最大化产量和活力。

  

艾美捷 Worthington新生儿心肌细胞分离系统内容:

该包装包含足够的材料,可用于五个单独的组织解离,每个包含多达 12 个心脏。对于较大或较小的组织样本,在每个步骤中准备相应体积的试剂,并按照协议中所述的相同比例将它们组合起来。

• 小瓶 1 : 1 瓶,500 毫升:无菌不含钙和镁的汉克平衡盐溶液 (CMF HBSS),pH 7.4。除了用作解离的介质外,该溶液还用于重构小瓶 #2 和 #3 的内容物。

• 小瓶 2:5 小瓶,每瓶 1000 µg:Worthington 胰蛋白酶(代码:TRLS),3X 结晶,用 1mM HCl 透析,通过 0.22 微米孔径的膜过滤,并冻干。使用前,用 2ml CMF HBSS(1 号小瓶)复溶并轻轻旋转以溶解内容物。储存在 2-8°C。

• 小瓶 3: 5 小瓶,每瓶 2000 µg:Worthington 大豆胰蛋白酶抑制剂(代码:SIC),一种 0.22 微米孔径的膜过滤冻干粉末。使用前,用 1ml CMF HBSS(1 号小瓶)复溶并轻轻旋转以溶解内容物。储存在 2-8°C。

• 小瓶 4:5 小瓶,每个 1500 单位:Worthington 纯化胶原酶(代码:CLSPA),一种 0.22 微米孔径膜过滤的冻干粉末,经过色谱纯化。它每毫克含有少于 50 个酪蛋白酶单位,由两种可分离但非常相似的胶原酶组成。使用前,用 5ml Leibovitz L-15 培养基(如下所述制备)复溶并轻轻旋转以溶解内容物。储存在 2-8°C。

• 装有 Leibovitz L-15 培养基粉末的袋子:1 x 1L,通过切开信封顶部并将内容物倒入装有 800 毫升细胞培养级水的烧杯中来重构袋子的全部内容物。用额外的 100 毫升冲洗袋子 2-3 次。使总体积达到 1 升并通过 0.22 微米孔径的过滤器过滤。

该试剂盒还包括 5 个细胞过滤器 (Falcon),这是一张将酚红颜色与 pH 值相关联的卡片,用于检查平衡盐溶液和培养基。

艾美捷 Worthington新生儿心肌细胞分离系统参考文献:

1.Engelmann, G., McTiernan, C., Gerrity, R., Samarel, A.: 技术 2 , 279, 1990

3.Fratalli, V. 和 Steiner, R.: 大豆抑制剂。一、从商品粗制大豆胰蛋白酶抑制剂中分离出三种抑制剂及其一些性质 , 生物化学 7 , 521, 1968

4.Freshney, R. Ian: 《动物细胞培养基本技术手册》,第 4 版。,, Wiley-Liss, Inc., 纽约, , 2000

5.Gross, W.、Schopf-Ebner, E. 和 Bucher, O.: 分离心肌细胞均质培养物的制备技术 , Exp Cell Res 53 , 1, 1968

 

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