本文主要是介绍小鼠大脑冰冻切片,希望对大家解决编程问题提供一定的参考价值,需要的开发者们随着小编来一起学习吧!
一:准备工具
孔板(小鼠脑是12孔板,脊髓24孔板) ,PBS 1X ,长刀片,OCT,锡纸及正方体模具,备用冻头,酒精,吸水纸,记号笔,镊子(钝头用来夹出组织,尖头用来夹片)
二:准备工作
1.酒精擦拭工作台
2.开机设置温度(一般-20)
3. 插入刀片,旋紧
4.用锡纸制作正方体模具
5.12孔板标记日期,编号。用胶头滴管滴入PBS
实验步骤:
1.温度降到-20℃后,在冻头和模具中滴入OCT。
冷冻好后,冻头放入机器削平表面
2.镊子夹出组织放在吸水纸上吸水,正方体锡纸模具表面标记好所放组织的编号→组织摆在正方体锡纸模具中(一般脑组织嗅球侧朝模具标记的方向)→滴入OCT没过组织→冷冻凝固
3.完全凝固后,在前面滴OCT并修平整的冻头上再滴一滴OCT(为了粘连),锡纸脱模,嗅球侧朝上粘在冻头上。。
4.准备好后开始切片
先设置好厚度,调整机器位置(本次实验修整的厚度是50mm,切片厚度是30mm)
修整时不需要盖玻璃挡板,留片时需要盖。挡板前端差不多与刀片齐平
5.把孔板伸入箱内,用镊子夹起脑片,垂直放入PBS中。孔板上标记好开始出现血肿的地方
6.清理,关机。脑片放置在4℃保存
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