宿主物种丨Jackson告诉你选择二抗的注意事项

蛋白质印迹实验中二抗的选择是非常重要的。那么接下来就一起来看Jackson ImmunoResearch公司选择二抗的相关注意事项吧~

宿主物种的相容性

如果使用多种二抗，例如探测两种一抗，请选择相同的宿主物种以尽量减少任何交叉反应。如果这不可能，则选择与实验中其他二抗的宿主物种交叉吸附的二抗。

交叉反应物种

虽然在蛋白质印迹中不常见，但某些应用需要针对其他物种吸附的二抗，以尽量减少对内源性免疫球蛋白的识别（例如用抗大鼠一抗探测小鼠组织裂解物）

或其他一抗。因此，请选择可用于预期应用的具有适当交叉吸附的二抗宿主。

经验或偏好

宿主物种的选择通常归结为个人偏好或先前的实验验证。在不同宿主物种中产生的二抗之间似乎几乎没有质量差异，只是某些物种更适合大规模生产。

特异性

选择具有正确特异性的二抗很重要。尽管全 IgG (H+L) 适用于大多数免疫测定，但其他专业特异性允许设计更复杂的实验，以消除不必要检测的潜在干扰。

抗 IgG (H+L)

Jackson ImmunoResearch公司抗 IgG (H+L)与 IgG 分子的重链和轻链都发生反应，即与 IgG 的 Fc 和 F(ab')2 / Fab 区发生反应（图 1）。抗 IgG (H+L) 抗体也与其他免疫球蛋白类别（IgM、IgA、IgD、IgE）和亚类发生反应，因为它们都共享相同的轻链（kappa 或 lambda）。

抗 IgG (H+L) 抗体比抗片段特异性抗体具有更广泛的表位识别。它们也被建议用于所有一般的免疫检测程序。

同种型特异性：Fc 特异性抗体

大多数一抗是 IgG 同种型。有时根据抗体的产生方式使用其他类别，例如 IgM 和 IgA。对免疫球蛋白的 Fc 域特异的二抗将特异于该特定 Fc 域的同种型。

因此，Fcγ特异性抗体将对IgG特异性，而对Fcα特异性的抗体将特异性检测IgA，而Fcμ将检测IgM。

还提供泛特异性抗体，可用于检测两种或多种同种型。根据您的应用程序，这可能很有用。选择对一抗同种型具有特异性的二抗。

子类特异性

由于同源 Fcγ 结构域的相似性，IgG 特异性抗体将检测所有 γ 同种型免疫球蛋白。根据用于生成一抗的小鼠品系，免疫球蛋白的亚类可能是 5 个中的 1 个。在同一个实验中，您可能有两种不同亚类的小鼠抗体靶向两种蛋白质。要区分两种一抗，您需要亚类特异性抗体。

小鼠表达构成其 IgG 同种型的五种可用 IgG 亚类中的四种。它们通常会产生 IgG1、IgG2b 和 IgG3，根据它们的菌株，它们还会表达 IgG2a 或 IgG2c。

Jackson ImmunoResearch 抗小鼠 IgG 亚类特异性抗体对五种单独的小鼠 IgG 亚类具有特异性。这些高度特异性的抗体旨在在多重实验中区分两种或多种不同的小鼠 IgG 亚类或用于确定小鼠 IgG 亚类。它们已被人、牛和兔血清蛋白吸附，以J大限度地减少与组织免疫球蛋白、培养细胞上的粘附牛 IgG 和兔一抗的交叉反应。亚类特异性抗体提供亚类之间的精细区分。

图 1：IgG 和 F(ab')2 和 Fc 区的带状图

图 2. 斑点印迹显示山羊抗小鼠 IgG、Fc��� 亚类特异性抗体的特异性。

单独的硝酸纤维素条（行）接受 100 ng “点”的小鼠 IgG 和每个亚类，然后用 PBST 中的 5% (w/v) BSA 封闭。在用 HRP 缀合的山羊抗小鼠亚类特异性抗体探测后，用 TMBM 底物显色条带。

阳性信号网格显示每个亚类导向抗体的特异性。一些亚类在总 IgG 池中的代表性较差，因此信号较弱（总 IgG 与抗 IgG2c 和 -IgG3）。用于探测的 HRP 偶联物是 115-035-205（抗小鼠 IgG1）、115-035-206（抗小鼠 IgG2a）、115-035-207（抗小鼠 IgG2b）、115-035-208（抗-小鼠 IgG2c) 和 115-035-209 (抗小鼠 IgG3)。

注意：

抗 IgG、Fcγ 片段特异性抗体与所有单克隆一抗的反应不同。对于对四个 IgG 亚类具有平衡反应性的抗小鼠 IgG、Fcγ 片段特异性抗体，选择山羊抗小鼠 IgG（亚类 1+2a+2b+3）、Fcγ 片段特异性（min X Hu、Bov、Rb Sr Prot ）。

此外，在单标记实验或涉及一种小鼠单克隆抗体和来自其他物种的一抗的多重标记实验中，对于小鼠单克隆抗体的一般检测，亚类特异性抗体不是必需的。