答疑时刻 | 我的SP2/0细胞是否该添加8-氮鸟嘌呤进行复壮了?

2023-12-26 15:12

本文主要是介绍答疑时刻 | 我的SP2/0细胞是否该添加8-氮鸟嘌呤进行复壮了?,希望对大家解决编程问题提供一定的参考价值,需要的开发者们随着小编来一起学习吧!

产品货号:BDXB-0001  SP2/0 小鼠骨髓瘤细胞

传代后5h

传代后24h

传代后第5天

Q:龙宝,我的细胞在用HAT筛选后有很多单克隆,但是检测后好多都不能分泌抗体,检测出来不是阳性的。这是为什么?

A:有可能是SP2/0细胞出现了返祖现象。

细胞在传代过程中,部分细胞可能有返祖现象,使其对HAT不敏感,所以部分未发生正确融合的SP2/0细胞遗留了下来,形成单克隆,但并不能分泌我们关心的抗体。

Q:那这种情况应该怎么办呢?

A:可以进行SP2/0细胞复壮,定期用8-AG进行处理,使生存的细胞对HAT呈均一的敏感性。

一、什么是SP2/0细胞8-AG复壮?

8-AG:8-氮鸟嘌呤,英文名8-azaguanine。针状结晶性粉末,约300℃分解;难溶于水,能溶于稀碱和稀酸液。

细胞DNA的合成主要分为两个途径,一个是主要途径,一个是补救途径,而HGPRT酶(次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷转移酶)是补救途径嘌呤的主要合成酶,正常情况下,细胞可同时通过这两种途径来合成DNA。由于8-氮鸟嘌呤也是一种嘌呤,在含有HGPRT酶时,可作为DNA合成的原料,但8-氮鸟嘌呤是一种碱性细胞杀伤因子,其干扰正常的生物合成途径,从而阻碍细胞发育,最终导致细胞的死亡。而HGPRT酶缺陷的骨髓瘤细胞SP2/0由于不能通过补救途径合成DNA,就可以存活下来。因此原则上经过8-氮鸟嘌呤筛选后的SP2/0细胞都是HGPRT酶缺陷株。

二、在单抗制备中的作用

 在单抗制备的过程中,有一个非常重要的步骤就是细胞融合,即杂交瘤细胞和B细胞的融合。一般情况下,在融合前2周开始复苏骨髓瘤细胞SP2/0,为确保SP2/0细胞对HAT的敏感性,若细胞长期传代或连续培养使用3~6月后, 可用8-氮鸟嘌呤筛选一次SP2/0细胞,以防止细胞的突变。

三、该怎样复壮?

使用方法:配置终浓度为10-20ug/ml的8-氮鸟嘌呤,选用10cm细胞培养皿,加入3×106个SP2/0细胞,待细胞贴壁后加入8-氮鸟嘌呤筛选,等待细胞长至95%左右时,重悬后再次分皿,每个皿3×106个细胞,重复上述筛选操作,待细胞长至95%左右时冻存,多冻存几支以备后续用。剩余细胞用完全培养基继续培养1-2周,就可以做接下来的细胞融合了。

注:8-AG难溶于水,可先用DMSO溶解后再用水稀释,DMSO使用终浓度需控制在0.1%,最高不超过

0.5%。

这篇关于答疑时刻 | 我的SP2/0细胞是否该添加8-氮鸟嘌呤进行复壮了?的文章就介绍到这儿,希望我们推荐的文章对编程师们有所帮助!



http://www.chinasem.cn/article/539891

相关文章

【Prometheus】PromQL向量匹配实现不同标签的向量数据进行运算

✨✨ 欢迎大家来到景天科技苑✨✨ 🎈🎈 养成好习惯,先赞后看哦~🎈🎈 🏆 作者简介:景天科技苑 🏆《头衔》:大厂架构师,华为云开发者社区专家博主,阿里云开发者社区专家博主,CSDN全栈领域优质创作者,掘金优秀博主,51CTO博客专家等。 🏆《博客》:Python全栈,前后端开发,小程序开发,人工智能,js逆向,App逆向,网络系统安全,数据分析,Django,fastapi

业务中14个需要进行A/B测试的时刻[信息图]

在本指南中,我们将全面了解有关 A/B测试 的所有内容。 我们将介绍不同类型的A/B测试,如何有效地规划和启动测试,如何评估测试是否成功,您应该关注哪些指标,多年来我们发现的常见错误等等。 什么是A/B测试? A/B测试(有时称为“分割测试”)是一种实验类型,其中您创建两种或多种内容变体——如登录页面、电子邮件或广告——并将它们显示给不同的受众群体,以查看哪一种效果最好。 本质上,A/B测

Codeforces Round #113 (Div. 2) B 判断多边形是否在凸包内

题目点击打开链接 凸多边形A, 多边形B, 判断B是否严格在A内。  注意AB有重点 。  将A,B上的点合在一起求凸包,如果凸包上的点是B的某个点,则B肯定不在A内。 或者说B上的某点在凸包的边上则也说明B不严格在A里面。 这个处理有个巧妙的方法,只需在求凸包的时候, <=  改成< 也就是说凸包一条边上的所有点都重复点都记录在凸包里面了。 另外不能去重点。 int

easyui同时验证账户格式和ajax是否存在

accountName: {validator: function (value, param) {if (!/^[a-zA-Z][a-zA-Z0-9_]{3,15}$/i.test(value)) {$.fn.validatebox.defaults.rules.accountName.message = '账户名称不合法(字母开头,允许4-16字节,允许字母数字下划线)';return fal

【408DS算法题】039进阶-判断图中路径是否存在

Index 题目分析实现总结 题目 对于给定的图G,设计函数实现判断G中是否含有从start结点到stop结点的路径。 分析实现 对于图的路径的存在性判断,有两种做法:(本文的实现均基于邻接矩阵存储方式的图) 1.图的BFS BFS的思路相对比较直观——从起始结点出发进行层次遍历,遍历过程中遇到结点i就表示存在路径start->i,故只需判断每个结点i是否就是stop

遮罩,在指定元素上进行遮罩

废话不多说,直接上代码: ps:依赖 jquer.js 1.首先,定义一个 Overlay.js  代码如下: /*遮罩 Overlay js 对象*/function Overlay(options){//{targetId:'',viewHtml:'',viewWidth:'',viewHeight:''}try{this.state=false;//遮罩状态 true 激活,f

linux 判断某个命令是否安装

linux 判断某个命令是否安装 if ! [ -x "$(command -v git)" ]; thenecho 'Error: git is not installed.' >&2exit 1fi

利用matlab bar函数绘制较为复杂的柱状图,并在图中进行适当标注

示例代码和结果如下:小疑问:如何自动选择合适的坐标位置对柱状图的数值大小进行标注?😂 clear; close all;x = 1:3;aa=[28.6321521955954 26.2453660695847 21.69102348512086.93747104431360 6.25442246899816 3.342835958564245.51365061796319 4.87

Python脚本:对文件进行批量重命名

字符替换:批量对文件名中指定字符进行替换添加前缀:批量向原文件名添加前缀添加后缀:批量向原文件名添加后缀 import osdef Rename_CharReplace():#对文件名中某字符进行替换(已完结)re_dir = os.getcwd()re_list = os.listdir(re_dir)original_char = input('请输入你要替换的字符:')replace_ch

SSM项目使用AOP技术进行日志记录

本步骤只记录完成切面所需的必要代码 本人开发中遇到的问题: 切面一直切不进去,最后发现需要在springMVC的核心配置文件中中开启注解驱动才可以,只在spring的核心配置文件中开启是不会在web项目中生效的。 之后按照下面的代码进行配置,然后前端在访问controller层中的路径时即可观察到日志已经被正常记录到数据库,代码中有部分注释,看不懂的可以参照注释。接下来进入正题 1、导入m