Ala-Pro-Ala-βNA,201985-58-2

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编号:   202241
中文名称:   三肽Ala-Pro-Ala-βNA
CAS号:   201985-58-2
单字母:   H2N-APA-βNA
三字母:   H2N-Ala-Pro-Ala-βNA
氨基酸个数:   3
分子式:   C21H26N4O3
平均分子量:   382.46
精确分子量:   382.2
等电点(PI):   -
pH=7.0时的净电荷数:   0.97
平均亲水性:   -0.5
疏水性值:   0.67
外观与性状:   粉末状固体
消光系数:   -
来源:   人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。
储存条件:   负80℃至负20℃

多肽H2N-Ala-Pro-Ala-βNA的合成步骤：

1、合成CTC树脂：称取0.85g CTC Resin（如初始取代度约为0.4mmol/g）和0.41mmol Fmoc-Ala-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入1.02mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Ala-CTC Resin。结构图如下：

2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Ala-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取1.02mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入2.04mmol DIPEA，0.97mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Pro-Ala-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Pro-Ala-CTC Resin

Fmoc-Ala-Pro-Ala-CTC Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Ala-Pro-Ala-CTC Resin，结构如下：

5、N端临时Boc保护：加适当DMF到树脂中，再依次加入4.08mmol DIPEA，2.04mmol Boc酸酐溶液，鼓氮气反应30分钟。取小样茚三酮检测为无色。Boc酸酐：DIPEA：树脂=6：12：1（摩尔比）。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到 Boc-Ala-Pro-Ala-CTC Resin。结构如下：

6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Boc-Ala-Pro-Ala-CTC Resin。在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Boc-Ala-Pro-Ala-COOH的结构图如下。

7、2-萘胺反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入1.02mmol 2-萘胺到树脂中，再加入2.04mmol DIPEA、0.97mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到 Boc-Ala-Pro-Ala-βNA。结构如下：