PEI转染试剂操作步骤

2024-06-04 10:52
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本文主要是介绍PEI转染试剂操作步骤,希望对大家解决编程问题提供一定的参考价值,需要的开发者们随着小编来一起学习吧!

细胞治疗是指采用生物工程的方法获取具有特定功能的细胞,并通过体外扩增、特殊培养等处理后,使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞等功能,从而达到治疗某种疾病的目的。聚乙烯亚胺(PEI)转染是目前应用最广泛的rAAV质粒共转染HEK293细胞的方法之一。与钙介导的转染相比,PEI更可靠;与脂质体介导的转染相比,PEI具有更好的可扩展性和成本效益。已在众多研究文献中被证明是创建高传染性rAAV/LV的有效选择。

中科百抗Bestop™ PEI线性转染试剂(BM350101)是一种高性能转染试剂,专为稳健、低成本和可扩展的瞬时基因表达而设计,是用于瞬时转染 HEK293 和 CHO 悬浮培养物的最常用试剂,也是在哺乳动物表达系统中生产重组蛋白、抗体和病毒(AAV、BV 等)的首选试剂。Bestop™ PEI线性转染试剂具备高效的转染能力,同时兼顾低毒性,能够有效避免对细胞的损伤,利于转染后细胞存活。下面小编将以Bestop™ PEI线性转染试剂为例,向大家介绍一下PEI转染试剂操作步骤。

PEI转染试剂使用比较方便,对血清与抗生素兼容性强。具体操作步骤范例如下(以HEK293细胞为例):

1.转染前,确保细胞存活率大于95%,活细胞密度在(1.5~2.0)×106cells/mL之间;

2.将活细胞密度稀释至1.05×106cells/mL;

3.将pDNA和1mg/mL Bestop™PEI线性转染试剂颠倒数次,混匀;

4.每毫升待转染培养物转1μg pDNA到一个干净的小瓶中。用新鲜培养基稀释至20μg/mL(5%最终培养体积)。

5.每毫升待转染培养物转3μL 1 mg/mL中科百抗Bestop™ PEI线性转染试剂(BM350101)至干净的小瓶中。用培养基稀释至60μg/mL(5%最终培养体积)。

6.将稀释的pDNA和中科百抗Bestop™ PEI线性转染试剂(BM350101)混合。颠倒几次,在室温下静置10分钟。使用前将密封的容器轻轻颠倒一次。

7.每90 mL培养基转染10 mL pDNA/PEI混合物。在混合的同时逐渐将混合物加入到培养基中,孵育细胞。

8.转染后:如果使用增强剂或补充剂,可以在转染后6小时的任何时间添加。传代培养也可以在6小时后进行。如果使用GFP对照,48小时后应观察到转染率超过70%。对于优化过的方法,80%以上的转染率是合理的。

以上就是PEI转染试剂的操作步骤啦,小编在这里还要提醒大家,初次使用PEI进行转染时,请先优化出适合自己实验的最佳DNA和PEI比例,以便转染实验可以顺利、准确地完成。

这篇关于PEI转染试剂操作步骤的文章就介绍到这儿,希望我们推荐的文章对编程师们有所帮助!



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